Coriell Institute细胞的实验注意事项和培养操作介绍

　　Coriell Institute细胞冻存和复苏实验原理：细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，可以保存细胞活力，目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。

        细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

　　一、细胞冻存和复苏实验注意事项：

　　1、从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存。

　　2、将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。

　　3、冻存和复苏用新配制的培养液。

　　二、Coriell Institute细胞培养操作：

　　1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜，换液并检查细胞密度。

　　2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　3、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　4、加1ml消化液于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

　　5、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　6、待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。