23966上海鼎桑代理

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我们公司zui大优势是强大的采购：

  上海鼎桑生物科技有限公司一家专注于生命科学的科技企业，由在国内科研试剂领域有着丰富从业经验的技术团队和管理团队组建而成，专营进口生物试剂，科学仪器，实验消耗品等。
       公司将不断把上优质的产品引入国内市场，满足客户的需求，公司也将紧跟生命科学的发展，为广大科研工作者探索生命科学的奥秘奉献绵薄之力.

23966上海鼎桑代理

美国POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生产和经营LIFE SCIENCES生命科学（胶体金,不含甲醛的甲醇等），病理学和显镜学 微球和粒子和磁珠各种单体和聚体等产品。polysciences公司是世界上zui大zui全的23966上海鼎桑代理 多聚化合物供应商,同时是世界*的免疫学,组织化学试剂耗材供应商.

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转染试剂线性PEI溶液的配制（1mg/ml）

聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）是聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳个原子，即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。PEI，可用作转染试剂，它可以缩聚DNA分子形成颗粒并转染真核细胞。有实验证明，分子量为25000的线性PEI即Polysciences 23966转染效率zui高。

下面将主要介绍polysciences 线性PEI(#23966)的产品特性及其溶液的配制过程。

1. 产品特性:

产品名称：线性聚乙烯亚胺(PEI)

2. 溶液配制

此指导说明书是经polysciences公司研究，测试及其客户反馈的后编写的。下面推荐一种简单适用而的方法，讲述如何配制浓度为1mg/mL的转染试剂的配制。

材料：

1g #23966、1L 纯水（Milli-Q®纯水，注射用水（WFI），或类似的生物级水）、12 M盐酸、10 M氢氧化钠、一次性0.1-0.2µm PES真空无菌过滤器、无菌高聚乙烯或聚丙烯试剂瓶。

器材：

1 L 玻璃烧杯、1 L玻璃量筒、核准pH计、2支1 mL塑料移液管、托盘、聚四氟乙烯（PTFE）搅拌棒、真空泵

配制过程：

1g #23966——900mL水溶解——搅拌、加热（60-80°C）——加HCl调pH到2.0左右——盖上烧杯，搅拌3h（直至粉末*溶解）——冷却至室温——加NaOH调pH到6.9-7.1——移液到量筒，加水补足至1L——真空过滤消毒——分装，-20°C保存。

备注：加热或加酸都有助于PEI溶解。当然酸可能不用加那么多，详细用量可试加一点搅拌看看，足够溶解就行，不一定需要加到pH那么低。

试剂储存：

冷冻部分溶液可在-20°C保存长达一年；部分解冻的溶液可在4°C保存2周，不可反复冻融。

粉末储存：

未开封的粉末有效期两年。可在室温下保存直至使用。

转染操作流程：(瞬时转染方法) 转染效率（部分数据参考，本数据来源于网络，不作为售后投诉依据）

1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG 公司 LS004196)消化细

胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置

入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。

2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其

升至室温。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适

量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性 PEI 转

染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管，一边将稀释的线性 PEI 转染试剂滴

加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以

形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14

mL 离心管。

3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI 复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在

无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴 DNA-PEI 复

合物。转染 3 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2 培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转

染后快 的话7 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合检测时间。

细胞种类 中文名称 PEI 转染效率

HEK293 人胚肾细胞 90%-95%

293-T 人胚肾细胞 90%-95%

CHO-K1 仓鼠卵巢细胞 80%-90%

U251 人源神经胶质瘤细胞 80%-90%

Hela 人源宫颈ai细胞 70%-80%

COS7 猴 SV40 转化肾细胞 70%-80%

HepG2 人源肝癌细胞 70%-80%

NIH/3T3 小鼠胚胎成纤维细胞 60%-70%

胶质瘤干细胞 人源胶质瘤干细胞 60%-70%

Patu8988 人源胰腺癌细胞 60%-70%

U2OS 人源骨肉瘤细胞 60%-70%

转染试剂和 DNA 配比数据

细胞型号 培养基 每孔细胞数 DNA 的量 转染试剂量 和培养基混合 4-6h

293H DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293FT DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293E DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293F DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

COS7 DMEM 1.5×10

4

0.4µg 0.5µL DMEM+10%FBS

hela DMEM 2×10

4

0.3µg 0.5µL 1640+15%FBS

Caco2 MEM 3.5×10

4

0.3µg 0.75µL MEM+10%FBS

BHK21 MEM 2×10

4

0.2µg 0.5µL MEM+10%FBS

CHO-DG44 DMEM+HT+pro 2×10

4

0.5µg 0.5µL DMEM+HT+pro +10%FBS

RAW264.7 DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM +10%FBS

MCF7

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium

pyruvat

2×10

4

0.1µg 0.25µL

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium

pyruvat+10%FBS

SW480 IMDM 3×10

4

0.4µg 0.5µL IMDM +10%FBS

MDCK DMEM 4×10

4

0.6µg 1µL DMEM+10%FBS

CHO-K1 IMDM+Pro 3×10

4

0.2µg 0.5µL IMDM+Pro +10%FBS

HepG2 DMEM 3×10

4

0.5µg 0.75µL DMEM+10%FBS

A549 DMEM 2×10

4

0.3µg 0.5µL DMEM+10%FBS

NIH/3T3 DMEM 1.5×10

4

0.1µg 0.75µL DMEM+10%FBS

vero DMEM 3×10

4

0.3µg 0.75µL DMEM+10%FBS

sf9 SIM SF 5×10

4

0.4µg 0.75µL SIM SF+10%FBS