Polysciences 24765-1试剂
更新时间：2024-08-14
Polysciences 24765-1试剂，细胞转染在基因表达和蛋白质研究领域至关重要。Polysciences 24765-1，作为一种有效的转染试剂，能够高效地将DNA引入细胞内。本文将详细介绍Polysciences 24765-1的使用方法。
| 品牌 | 其他品牌 | 产地 | 进口 |
|---|---|---|---|
| 加工定制 | 否 |
一、贴壁细胞转染：Polysciences 24765-1试剂
以293T细胞为例，需要精确控制转染条件以确保*高效率。以下是具体步骤：
细胞准备：
使用胶原酶处理细胞并计数。在6孔板中以每孔2×106细胞接种。每孔加入2 mL新鲜的DMEM/F12+5%FBS 培养基和1 mL的细胞悬液，置于37℃，5%CO2培养箱培养24 h。24 h后,移除之前培养基，每孔加入2 mL新鲜的DMEM/F12+5%FBS。
转染过程：
1.检查细胞汇合度，达到70%-80%时开始转染。
2.分别用两份100 µL无血清培养基稀释DNA，使DNA终浓度为1 µg/ml（DNA/总培养体积）和适当比例的适量Polysciences 24765-1。DNA:PEI 的比例要依据自己实验摸索最适比例。
3.将稀释的Polysciences 24765-1转染试剂与质粒（总体积200 µL）轻轻混匀，室温孵育30 分钟。
4.PEI-DNA 复合物滴加到细胞培养板每个孔中，轻摇混匀。注意轻轻沿着孔板边缘滴入，以免破坏细胞的粘附性。
5.将培养板放入37℃，5%CO2培养箱培养中培养24 h。
结果观察：
在24小时后使用荧光显微镜观察转染效果，超过80%的293T 细胞在转染后的24 h可以观察到绿色荧光。
二、悬浮细胞转染：Polysciences 24765-1试剂
悬浮细胞转染步骤略有不同，小规模转染时，用新鲜的培养基重悬浮，使细胞密度达到 1×106cells/mL，如需大规模转染细胞密度要到达2-3×106cellsml/mL。
以293F细胞为例：
细胞准备：
传代接种于20 mL 悬浮细胞生长培养基中(36.5℃，120 rpm，5%CO2 )培养细胞至1×106 cells/mL的密度，旋紧瓶口放入摇床，2~4 小时后可以进行转染。
转染过程：
1.用1 mL无血清培养基稀释适量的DNA，使DNA 终浓度为1 µg/ml，混匀并静置5 min。
2.用1 mLOptiPRO
SFM(无血清培养基)稀释适当比例的PEI 40000，混匀并静置10 min。
3.将稀释的24765-1转染试剂与质粒轻轻混匀，室温孵育30分钟。
4.将PEI-DNA 转染复合物逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床（36.5℃，5%CO2，120 rpm）。
5.基因表达可在24-72小时后检测，时间取决于细胞系和转基因。
